文献类型： 中文期刊

作者： 冯贤辀 ¹ ; 陈辉 ¹ ; 贾永宏 ¹ ; 刘松奇 ¹ ; 温飞 ¹ ; 郭松茂 ¹ ; 韩帅琪 ¹ ; 胡建宏 ¹ ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物科技学院;陕西省畜牧产业试验示范中心;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 秦川牛;皮肤组织;成纤维细胞;组织块培养法;酶消化法

期刊名称： 生物学杂志

ISSN： 2095-1736

年卷期： 2024 年 41 卷 002 期

页码： 110-115

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立秦川牛体细胞分离培养体系,分别选用组织块培养法、胰酶-胶原酶消化法和胶原酶-胰酶消化法提取秦川牛耳缘成纤维细胞.结果表明:组织块培养法获取成纤维细胞所需周期长,组织块贴壁 17 d后可获得原代成纤维细胞,而双酶消化法在原代细胞贴壁至9 d时便可进行传代纯化培养;与双酶消化法Ⅱ相比,双酶消化法I获得的原代成纤维细胞浓度 1.24×106/mL显著高于双酶消化法Ⅱ(0.9×106/mL)(P<0.05);传代培养 5 d后,细胞汇合度达到 80%,取第三代成纤维细胞进行免疫荧光和流式细胞术鉴定,成纤维细胞纯度达到 95%以上;纯化后的成纤维细胞培养至第 3 天,开始进入对数生长期,第 8 天时增殖速度下降进入平台期.因此,双酶消化法I(0.25%胰酶处理 30 min,再用 1%胶原酶处理 60 min)为分离培养秦川牛耳缘成纤维细胞的最佳方法.