文献类型： 中文期刊

作者： 霍明洋 ¹ ; 陈为 ² ; 赵娜 ³ ; 孙成彪 ³ ; 董明鑫 ³ ; 王燕 ³ ; 许娜 ⁴ ; 刘文森 ² ;

作者机构： 1.延边大学医学院

2.延边大学医学院生理学与病理生理学教研室

3.中国农业科学院长春兽医研究所

4.吉林医药学院

关键词： γ-银环蛇毒素;延髓;谷氨酸;γ-氨基丁酸;呼吸障碍

期刊名称： 中国药理学与毒理学杂志

ISSN： 1000-3002

年卷期： 2025 年 39 卷 002 期

页码： 118-128

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 探究γ-银环蛇毒素（γ-BGT）致小鼠呼吸障碍作用及其可能机制。方法 (1) 6只雄性昆明小鼠麻醉后行气管插管术，记录呼吸频率，呼吸稳定后iv给予γ-BGT 6 mg·kg-1，出现呼吸频率降低后iv给予尼可刹米12.5 mg·kg-1。采用BL420信号采集与处理系统检测小鼠呼吸频率。(2)雄性昆明小鼠随机分为正常对照组（生理盐水，ip）、γ-BGT组（6 mg·kg-1,ip）、γ-BGT+尼可刹米组（ip给予γ-BGT 6 mg·kg-1，当小鼠出现呼吸浅慢和腹式呼吸加强时，ip给予尼可刹米12.5 mg·kg-1）。ELISA法检测延髓组织中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量。Western印迹法检测延髓组织中谷氨酸脱羧酶65(GAD65)、GAD67蛋白表达水平。(3)体外培养原代小鼠延髓神经元，并分为细胞对照组、γ-BGT组、氯贝胆碱组、加拉碘铵组、γ-BGT+H-89组、γ-BGT+Y-27632组。γ-BGT组、氯贝胆碱组、加拉碘铵组分别用γ-BGT40 mg·L-1、氯贝胆碱100 mmol·L-1、加拉碘铵100 mmol·L-1孵育4 h,γ-BGT+H-89组、γ-BGT+Y-27632组加入γ-BGT 40 mg·L-1预处理4 h后，分别更换蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89 50 mmol·L-1、Ca2+通道抑制剂Y-27632 50 mmol·L-1继续孵育2 h。ELISA检测原代小鼠延髓神经元内Glu、GABA、环磷酸腺苷（cAMP）含量和钙蛋白酶水平。Western印迹法检测原代小鼠延髓神经元内GAD65、GAD67蛋白表达水平及PKA磷酸化水平。Fluo-4荧光探针检测原代小鼠延髓神经元内Ca2+水平。结果 (1)与正常对照组比较，γ-BGT组小鼠呼吸频率显著降低（P<0.05）,γ-BGT+尼可刹米组呼吸频率显著回升（P<0.05）。(2)与正常对照组比较，γ-BGT组Glu含量显著降低（P<0.05）,GABA含量显著升高（P<0.05）,Glu/GABA比值显著降低；GAD65和GAD67蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与γ-BGT组比较，γ-BGT+尼可刹米组Glu含量显著升高（P<0.05）、GABA含量显著降低（P<0.05）,Glu/GABA比值显著升高；GAD65和GAD67蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。(3)与细胞对照组比较，γ-BGT组Glu含量显著降低（P<0.05）,GABA含量显著升高（P<0.05）,Glu/GABA比值显著降低；GAD65和GAD67蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;cAMP含量显著升高（P<0.05）,PKA磷酸化水平显著升高（P<0.05）,Ca2+水平和钙蛋白酶活性显著升高（P<0.05）。与γ-BGT组比较，加拉碘铵组Glu,GABA,Glu/GABA比值和GAD表达水平等方面均呈现相似的变化趋势；γ-BGT+Y-27632组钙蛋白酶活性显著降低（P<0.05）,GAD65和GAD67蛋白表达显著降低（P<0.05）;γ-BGT+H-89组Ca2+水平和钙蛋白酶活性显著降低（P<0.05）。结论 γ-BGT中毒可导致小鼠呼吸障碍，其机制与γ-BGT通过拮抗延髓神经元M2毒蕈碱乙酰胆碱受体激活cAMP/PKA信号通路，引起细胞内Ca2+水平升高，使GAD表达增加和活性增强，导致延髓Glu和GABA含量失衡有关。