文献类型： 中文期刊
作者： 张楚晗 1 ; 赵帅阳 1 ; 朱浩瀚 1 ; 苏书晓 1 ; 关贵全 1 ; 罗建勋 1 ; 殷宏 1 ; 刘军龙 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所
关键词： 环形泰勒虫;Tams1;单个B细胞抗体
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2024 年 54 卷 009 期
页码： 1209-1215
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本研究旨在利用单个B细胞抗体技术制备环形泰勒虫Tams1蛋白特异性单克隆抗体并对其反应性进行鉴定。构建重组质粒pET-30a-Tams1，并进行蛋白原核表达与纯化。纯化的Tams1蛋白免疫健康黄牛，第4次免疫后结合流式分选技术，从外周血单个核细胞获得分泌抗Tams1特异性单克隆抗体的B淋巴细胞（Ig M-/CD21+/抗原+B淋巴细胞）。经单细胞裂解及反转录后，通过巢式PCR扩增获得Ig G天然配对的轻/重链可变区域序列，并克隆至包含Ig G轻/重链恒定区域的真核表达载体。配对质粒共转染HEK-293T细胞后，收集细胞培养上清，Western-blot结果显示所得8株抗体均能与Tams1蛋白结合。同时IFA结果证明8株抗体可与裂殖子表面抗原Tams1特异性结合。上述结果表明，本研究成功获得8株Tams1特异性单克隆抗体，为后续该蛋白的功能研究及单个B细胞抗体制备技术平台的建立奠定了基础。
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