文献类型： 中文期刊
作者： 黄冬 1 ; 陈普成 1 ; 刘兵 1 ; 唐猛 1 ; 柳金雄 1 ; 姜永萍 1 ; 陈化兰 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
关键词： DNA疫苗;双价表达质粒;eGFP
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2016 年 38 卷 04 期
页码： 257-261
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E。并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况。结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP。其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上。本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗。
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