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葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备

文献类型： 中文期刊

作者： 任芳 1 ; 董雅凤 1 ; 张尊平 1 ; 范旭东 1 ; 胡国君 1 ; 李正男 1 ; 周俊 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心

关键词： 葡萄病毒B;外壳蛋白;原核表达;抗血清

期刊名称： 园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2016 年 43 卷 11 期

页码： 2233-2242

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据已报道的葡萄病毒B(Grapevine virus B,GVB)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从葡萄中扩增获得GVB外壳蛋白基因(cp),大小为594 bp。通过序列测定和分析,选取优势分离物GVB-JFL cp基因克隆到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化融合蛋白pET-GVB CP。SDS-PAGE电泳结果显示,融合蛋白获得过量表达,分子量约26 kD。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗血清。采用间接ELISA和dot-ELISA对抗血清特异性进行检测,结果表明,抗血清可与感染GVB的西方烟和葡萄样品发生阳性反应,与健康植株及感染同属另一种病毒葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)的样品不反应,阳性样品检测效价达1︰4 000,16个田间样品摩擦接种至烟草后有9个样品ELISA检测为阳性,表明制备的抗血清可用于GVB的特异性检测。

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