文献类型： 中文期刊

作者： 赵丹钰 ¹ ; 李婷婷 ¹ ; 王萌 ¹ ; 祁淑芸 ¹ ; 梁勤立 ¹ ; 张芝玮 ¹ ; 朱兴全 ² ; 王金磊 ¹ ;

作者机构： 1.家畜疫病病原生物学国家重点实验室

2.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

关键词： 弓形虫;氧化应激;超氧化物歧化酶(SOD);CRISPR-Cas9;生物学功能

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年 52 卷 007 期

页码： 882-891

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 超氧化物歧化酶(SOD)是一种重要的抗氧化酶,参与一系列重要的细胞过程,可保护机体免受氧化损伤,在寄生虫氧化还原平衡调节中发挥重要作用.本研究利用CRISPR-Cas9介导的同源重组技术,分别构建了弓形虫Ⅰ型RH虫株和Ⅱ型Pru虫株的sod3基因缺失株(RH△sod3;Pru△sod3);通过体内和体外试验,探究了sod3基因的基本生物学功能及其在小鼠体内的毒力作用.噬斑试验分析表明,RH△sod3和Pru△sod3所形成噬斑的大小和数量与野生株相比无显著差异(P>0.05).研究发现缺失sod3基因不影响弓形虫RH速殖子在体外的入侵效率、细胞内复制能力、逸出能力、活性氧(ROS)水平、总抗氧化能力(T-AOC).缓殖子转化试验发现,缺失sod3基因不影响弓形虫Pru虫株由速殖子向缓殖子转化.小鼠毒力试验表明,分别单独感染100个RH△sod3和RH野生株速殖子的昆明鼠均在感染后第8~10天发生死亡;分别单独感染5×105个Pru△sod3和Pru野生株速殖子的昆明鼠均在感染后10 d内发生死亡;分别单独感染5×103个Pru△sod3和Pru野生株速殖子的昆明鼠所形成的脑包囊数量无显著差异(P>0.05).对弓形虫转录组数据库现有数据分析表明,SOD3在弓形虫孢子化卵囊阶段的表达量显著高于其他时期,说明SOD3可能参与卵囊孢子化过程.本研究成功构建了弓形虫sod3基因缺失株(RH△sod3;Pru△sod3),为进一步研究sod3基因在Ⅰ型和Ⅱ型虫株的其他生物学功能奠定了基础.