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Cry1Ah蛋白标准物质候选物的制备与纯化(英文)

文献类型： 中文期刊

作者： 郭林 1 ; 耿丽丽 2 ; 孙晓晓; 王美玲; 束长龙; 张杰;

作者机构： 1.吉林农业大学农学院

2.中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室

关键词： 转基因生物;有证标准物质;苏云金芽胞杆菌;Cry1Ah蛋白

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2019 年 8 期

页码： 1511-1519

收录情况： 北大核心

摘要： 随着转基因技术的迅猛发展,转基因产品的安全性受到了广泛关注.转基因检测用有证标准物质在确保转基因产品定性、定量检测结果的可比性和可追溯性方面发挥着重要作用.但转基因蛋白质标准物质的开发相对缓慢,其中一个难点是制备高纯度的转基因蛋白质候选物.苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis cry1Ah1基因因其对亚洲玉米螟等鳞翅目害虫有很好的杀虫活性,已用于转基因抗虫作物的研制,并获得具有较好抗虫性状的转基因株系.为了研发Cry1Ah蛋白有证标准物质,亟需建立其制备及纯化体系.文中优化了利用Bt表达系统制备Cry1Ah蛋白的体系,利用离子交换色谱法和排阻色谱法逐级纯化的方法,获得了高纯度的Cry1Ah蛋白(排阻色谱纯度:99.6%).生物活性测定结果表明,纯化的Cry1Ah蛋白与原毒素对小菜蛾Plutellaxylostella的杀虫活性没有显著差异.最后使用Edman降解法和质谱法确定了Cry1Ah蛋白活化后的氨基酸序列.综上所述,获得的Cry1Ah纯蛋白可用于蛋白质标准物质的研制.

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