文献类型： 中文期刊

作者： 张增艳 ¹ ; 许景升 ¹ ; 刘耀光 ² ; 王晓萍 ¹ ; 林志珊 ¹ ; 辛志勇 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院作物育种栽培研究所

2.华南农业大学生物技术学院

关键词： 中间偃麦草;黄矮病抗性;抗病基因同源序列;可转化人工染色体(TAC);克隆池PCR

期刊名称： 作物学报

ISSN： 0496-3490

年卷期： 2004 年 30 卷 03 期

页码： 189-195

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据已克隆植物抗病 (R)基因编码蛋白质的保守结构设计简并引物 ,利用同源序列法PCR扩增、克隆到 9个具有开放阅读框的中间偃麦草R基因同源片段 (ResistanceGeneAnalogs ,RGAs)。利用抗黄矮病材料 (含Bdv2 )、感黄矮病材料 (无Bdv2 )进行RFLP分析 ,筛选到 1个NBS类RGA序列TirgaZ1与Bdv2连锁。根据TirgaZ1的序列重新设计 1对引物 ,优化PCR扩增条件 ,将其转化为经典特异PCR标记 (SC TZ1)。利用该特异PCR标记 (SC TZ1)和克隆池 PCR法筛选抗黄矮病小麦 中间偃草易位系HW6 4 2基因组的可转化人工染色体 (Transformation competentArtificialChromosome ,TAC)文库 ,分离到 4个阳性TAC克隆T1～T4。限制酶切图谱分析结果表明 ,T1～T3为 1类 ,插入片段约 2 3kb ,T4为另 1类 ,插入片段约为 2 5kb。以TirgaZ1为探针 ,通过Southern杂交证实了阳性TAC克隆T1、T4为含有TirgaZ1序列的抗病基因候选克隆。分别以中间偃麦草、HW6 4 2和小麦亲本为探针对阳性克隆T1、T4进行Southern分析 ,结果表明 ,阳性TAC克隆T1、T4的插入片段均具有抗黄矮病易位系的中间偃麦草易位染色体片段 7XL ,T1、T4为抗黄矮病基因候选克隆。测定和分析阳性克隆T1插入片段 5 '端 - 6 4 4 8bp部分的序列 ,表明其最长完整开放阅读框 (OpenReadingFrame