文献类型： 中文期刊

作者： 于海龙 ¹ ; 许榜丰 ² ; 石晓娜 ² ; 马天馨 ² ; 闫婉婉 ² ; 李雪松 ² ; 杨健美 ² ; 滕巧泱 ² ; 刘芹防 ² ; 苑纯秀 ² ; 赵权 ³ ; 李泽君 ² ;

作者机构： 1.吉林农业大学动物科学技术学院    

2.中国农业科学院上海兽医研究所

3.吉林农业大学动物科学技术学院

关键词： 流感病毒;四环素调控系统;HA基因;诱导表达

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2021 年 005 期

页码： 13-18

摘要： 细胞培养流感病毒生产疫苗过程中细胞系的选择至关重要,本研究建立了可控表达H9N2亚型禽流感病毒（AIV） HA蛋白的MDCK细胞系,能有效支持H9N2流感病毒的扩增。本研究应用插入四环素调控元件和H9N2亚型禽流感病毒HA基因的重组质粒V2-H9,与辅助质粒pMDSV、psPAX2共转染293T细胞包装慢病毒,将包装出的慢病毒感染MDCK细胞,通过添加嘌呤霉素筛选出阳性的单克隆细胞。再用PR8 SH441病毒感染筛选出来的MDCK单克隆细胞。结果显示,流感病毒在其中4株MDCK单克隆细胞的HA效价接近于8;生长曲线结果显示,流感病毒在第34株MDCK单克隆细胞中复制效果最好;间接免疫荧光（IFA）和Western blot检验结果显示,第34株MDCK单克隆细胞H9 HA的表达量最高;将第34株MDCK单克隆细胞驯化后进行悬浮培养,每隔24 h测定细胞密度,结果表明,第34株MDCK单克隆细胞可以悬浮培养,且流感病毒在第34株MDCK悬浮细胞中HA效价可达9log2。以上结果表明,本研究获得了一株可高效扩增H9亚型禽流感病毒的MDCK细胞株,为流感弱毒疫苗的研发提供了新的研究方法和实验基础。