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利用高效的大片段DNA回收方法改良Fosmid文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 张翠翠 1 ; 赵胜 2 ; 王越 1 ; 张鹏 1 ; 常玉晓 2 ;

作者机构： 1.广西大学生命科学与技术学院

2.中国农业科学院深圳农业基因组研究所

关键词： Fosmid文库;大片段DNA回收;透析袋

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2020 年 36 卷 007 期

页码： 220-227

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 外源DNA插入片段为40 kb左右的Fosmid文库在基因组学研究中有广泛的应用,但长期以来,40 kb外源片段的分离与纯化依赖于传统的切胶并电洗脱至透析袋的方法,难以得到足够量的DNA片段,极大降低Fosmid文库构建的成功率.通过改进全自动核酸/蛋白质回收系统SageELF的操作流程,建立一种简单、便捷、高效地回收40 kb左右DNA片段的方法,并用其成功地构建高质量的Fosmid文库.从文库中随机挑选的25个单克隆,经过测序及酶切分析,发现该文库中插入的DNA片段大小为37.9±5.2 kb.以上结果表明,利用改良的操作方法回收40 kb基因组DNA,操作简捷、高效,片段大小精准;另外,用该DNA片段构建的Fosmid文库,插入片段比较集中,有利于后续的基因组学分析.

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