文献类型： 中文期刊
作者： 包红梅 1 ; 田国彬 1 ; 曾显营 1 ; 王秀荣 1 ; 陈化兰 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室
关键词： 禽流感;H10N8;双重荧光定量RT-PCR;检测方法
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2020 年 42 卷 012 期
页码： 1233-1238
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针.通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法.该方法可特异性地检测出H10N8亚型AIV的HA和NA基因,与其它亚型AIV及其他常见禽呼吸道病原均无交叉反应;能够检测到AIV的最低检出量为10-1 EID50/0.1 mL,比常规RT-PCR方法敏感100倍;批内和批间重复性试验的变异系数(CV)均小于2%.SPF鸡感染试验样品检测结果显示,该双重荧光定量RT-PCR方法和病毒分离鉴定方法的符合率为94.44%,与常规RT-PCR方法的符合率为88.23%,而常规RT-PCR方法与病毒分离方法的符合率为83.33%,表明该方法与病毒分离方法的准确率更接近,可以用于临床检测.本实验结果表明H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为H10N8亚型AIV的检测及监测提供了有力的技术手段.
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