文献类型： 中文期刊

作者： 孔杰 ¹ ; 刘文文 ¹ ; 蒋学乾 ¹ ; 何飞 ¹ ; 康俊梅 ¹ ; 王珍 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 蒺藜苜蓿;叶绿素合成酶（CHLG）;表达水平;紫花苜蓿;单株产量

期刊名称： 西北植物学报

ISSN： 1000-4025

年卷期： 2021 年 007 期

页码： 1079-1090

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 叶绿素由一系列酶促反应催化生成,其最后一步是叶绿素合成酶（chlorophyll synthase, CHLG）催化合成叶绿素a和叶绿素b。该实验主要以蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）生态型R108和两种不同秋眠级紫花苜蓿（Medicago sativa）为材料,采用生物信息学方法对蒺藜苜蓿叶绿素合成酶（MtCHLG）的进化关系和基因结构进行分析,采用实时荧光定量方法分析MtCHLG对光照/黑暗、脱落酸（ABA）及聚乙二醇（PEG）的响应,利用叶绿素酸酯a加氧酶（MtCAO）突变体确定其与MtCHLG的上下游关系,并分析豆科牧草紫花苜蓿中MsCHLG表达量与其株高和产量的关系。结果表明:（1）植物CHLG功能域保守,其基因结构高度一致,植物在向陆生进化的过程中,CHLG基因数目略有增加,内含子长度明显增长。（2）克隆到MtCHLG的CDS为1,137 bp,其编码378个氨基酸,蛋白与紫花苜蓿MsCHLG相似性高达99.2%。（3）qRT-PCR分析显示,MtCHLG基因主要在蒺藜苜蓿幼嫩叶中表达且受光诱导和黑暗抑制,表现为显著的昼增夜降的表达特征;100μmol·L^-1的ABA在短时间（2 h）处理后叶片中MtCHLG基因表达量下降为对照的26%（P<0.05）;5%的PEG长时间（24 h）处理后MtCHLG基因表达量降低至对照的42%（P<0.05）。（4）瞬时表达重组蛋白MtCHLG-GFP于烟草（Nicotiana benthamiana）表皮细胞,荧光检测结果显示,该蛋白主要定位在叶绿体上。（5）定量分析发现,mtcao突变体中几乎检测不到MtCAO基因的表达,且MtCHLG基因的表达水平约为野生型的44%,证明MtCAO功能缺失导致了MtCHLG转录水平降低,表明MtCHLG位于MtCAO的下游。（6）高秋眠级紫花苜蓿材料的株高为低秋眠级材料的2.5～3.5倍,其平均产量约为低秋眠级材料的2.1倍,且前者中MsCHLG基因的表达量略高于后者（1.2～1.5倍）;相关性分析发现,紫花苜蓿中MsCHLG基因的表达水平与株高、产量成正相关。研究暗示,MsCHLG表达可作为苜蓿产量早期预测的参考指标,CHLG基因也可作为培育高产豆科饲草的备选基因。