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mitoTALENs植物线粒体基因编辑载体的构建方法

文献类型： 中文期刊

作者： 周家伟 1 ; 武志强 1 ;

作者机构： 1.农业农村部合成生物学重点实验室 中国农业科学院深圳农业基因组研究所(岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心)

关键词： 线粒体基因编辑;mitoTALENs载体;Platinum gate TALEN assembly;multisite LR

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年 40 卷 010 期

页码： 172-180

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考.为解决这个问题,结合前人已发表的及本实验室摸索出的方法对mitoTALENs载体构建的完整过程进行了详尽描述,为之后利用mitoTALENs技术进行植物线粒体基因功能研究的研究者们提供重要参考.[方法]以水稻线粒体WA352 基因作为目的基因,利用其序列特异性区域设计了靶点TAL,首先采用Platinum gate TALEN assembly的两步组装技术分别构建了mitoTALENs的TALEN-left和TALEN-right载体,然后利用multisite LR反应将TALEN-left、TALEN-right及含有其他功能元件的进入载体和目的载体进行反应,生成最终的表达载体.[结果]第一步组装构建 10 个载体,第二步组装构建 2 个载体,最后通过multisite LR反应构建 1 个终表达载体.[结论]详细介绍了mitoTALENs载体的构建过程,为该技术使用者提供重要参考,以促进植物线粒体基因编辑研究领域的发展.

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