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基于布鲁菌bp26基因LAMP检测方法的建立及优化

文献类型： 中文期刊

作者： 马世辉 1 ; 贾沅铮 2 ; 王福成 2 ; 连丽燕 2 ; 蒋蔚 2 ; 陈兆国 2 ; 韩先干 2 ; 陈伟 1 ;

作者机构： 1.塔里木大学动物科学与技术学院

2.中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： 布鲁菌;环介导等温扩增;bp26;可视化检测

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 1043-1049

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 布鲁菌病严重影响畜牧业发展和公共卫生安全，及时、准确地检测布鲁菌是该病防控的关键。本研究基于布鲁菌bp26基因设计特异性的环介导等温扩增（LAMP）引物，建立布鲁菌LAMP检测方法。为获得最佳反应条件，对镁离子浓度、LAMP引物比例、反应设备等条件进行优化，对建立的LAMP检测方法的灵敏度、特异性进行评价。结果显示，建立的LAMP反应体系中镁离子浓度为8 mmol/L，内外引物比为6∶1时为最佳体系；分别在金属浴、恒温水浴锅、烘箱等不同环境下实验，结果无差异；对大肠杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌等8种不同细菌的特异性检测结果显示，该方法特异性良好。在最佳反应条件下，检测灵敏度为10 pg/μL。为获得良好的可视化检测效果，通过对反应体系中不同浓度的锰离子浓度进行优化，结果显示，锰离子浓度为0.1 mmol/L时可以建立最佳可视化效果。本研究建立的布鲁菌LAMP检测方法特异、灵敏、可视化，为布鲁菌的临床快速检测提供了技术支持。

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