文献类型： 中文期刊

作者： 彭丽华 ¹ ; 欧阳文琦 ² ; 曹东 ² ; 郭葳 ² ; 杨红丽 ² ; 郝青南 ² ; 陈水莲 ² ; 张婵娟 ² ; 袁松丽 ² ; 陈海峰 ² ; 沙爱华 ¹ ; 陈李淼 ² ;

作者机构： 1.长江大学农学院

2.中国农业科学院油料作物研究所/农业农村部油料作物生物学与遗传育种重点实验室

关键词： 大豆;CRISPR/Cas9;DNA快速提取法;靶点检测;高通量

期刊名称： 中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2025 年 47 卷 004 期

页码： 920-928

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛地应用于多种植物中，常规基因编辑靶点检测方法实验繁琐且耗时，成本较高，开发更简便和高通量的方法可以极大提高靶点检测的效率。本实验以南方大豆品种天隆一号为材料，开发了一种叶片DNA的快速提取方法——水磨法，缩短DNA提取和检测时间，并且提取的DNA可以保存20 d。此外，本文还进一步研究了将提取液替换为TE buffer后，在煮沸条件下，DNA的稳定性分析。结果表明：煮沸1 min、3 min、5 min和10 min后，4℃或-20℃放置的DNA样品均可以保存45 d。然后，将天隆一号为遗传背景的待测材料中的靶点序列PCR产物进行毛细管电泳，与对照材料相比，观察是否存在差异碱基的特异性条带，进而判断待测材料是否发生基因编辑及可能存在的编辑类型种类。本文将植物叶片DNA快速提取法和毛细管电泳技术相结合，更加快速、高通量地筛选大豆材料的突变情况及突变种类，为大豆重要性状基因功能分析提供技术支持。