文献类型： 中文期刊

作者： 欧云文 ¹ ; 王勤 ² ; 马炳 ² ; 马小元 ² ; 代军飞 ² ; 贾宁 ² ; 丁耀忠 ² ; 张永光 ² ; 张杰 ³ ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;开江县畜牧食品局动物疫病预防控制中心;达州职业技术学院;甘肃农业大学动物医学院

2.;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;开江县畜牧食品局动物疫病预防控制中心;达州职业技术学院;甘肃农业大学动物医学院

3.;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;开江县畜牧食品局动物疫病预防控制中心;达州职业技术学院;甘肃农业大学动物医学院;

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;美洲型;N蛋白;原核细胞;基因表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国生物制品学杂志

ISSN： 1004-5503

年卷期： 2017 年 09 期

页码： 948-953

收录情况： CSCD

摘要： 目的原核表达美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(North American genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus,NA-PRRSV)N蛋白,并制备多克隆抗体。方法以NA-PRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增N蛋白编码片段,克隆入原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒pET30a-NA-PRRSV-N,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达6 h。采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化表达的重组蛋白,复性后的重组N蛋白与弗氏佐剂混合乳化,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,制备兔抗NA-PRRSV-N蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验检测多克隆抗体的特异性,间接ELISA法检测血清抗体效价。结果经PCR、双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET30a-NA-PRRSV-N构建正确;重组N蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为24 000,纯度可达95%以上,可与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体能够识别重组N蛋白和全病毒抗原,抗体效价>1∶25 600,显著高于商品化疫苗组。结论成功在大肠埃希菌中表达了NA-PRRSV N蛋白,并制备了其多克隆抗体,为NA-PRRSV检测方法的建立奠定了基础。