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应用抑制性差减杂交法筛选植物青枯菌致病相关基因

文献类型： 中文期刊

作者： 徐进 1 ; 许景升 1 ; 张丽勍 1 ; 张昊 1 ; 冯洁 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室

关键词： 青枯菌;抑制性差减杂交;Ⅲ型分泌系统效应子;致病性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2012 年 20 卷 07 期

页码： 35-45

收录情况： 北大核心

摘要： 植物青枯菌(Ralstonia solanacearum)致病力分化菌株 Po82 兼具 2 号小种和 NPB(非香蕉致病)菌株的致病特征。为了研究该菌株致病力分化机理,本实验以 Po82 为待测菌株,构建了抑制性差减杂交文库。建库质量分析结果表明,具有较高的接头连接以及文库构建效率,插入片段平均长度为 300 bp,文库构建质量较好。对文库中随机挑取阳性克隆进行测序,共筛选出 44 个 Po82 菌株差异基因。生物信息学分析结果表明,所得差异基因主要涉及新陈代谢、转座酶、膜结构、分泌蛋白、毒力、转录因子以及未知功能等。利用基因敲除技术对其中的 c00283 基因功能进行了研究,结果表明,该基因在 Po82 菌株致病过程中起重要作用。半定量 RT-PCR 结果表明,c00283 基因在 hrp 诱导培养基中的表达情况与 hrpB 基因一致,初步确定其为Ⅲ型分泌系统效应子。基础生物学实验结果表明,该基因对 Po82 菌株的生长、生物膜形成及运动性没有影响。青枯菌 Po82 菌株抑制性差减杂交文库的构建及致病相关基因的功能分析,为后续致病力分化的分子机理研究提供基础材料。

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