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辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)实时荧光定量检测方法的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 马桂珍 1 ; 暴增海 2 ; 李世东 3 ; 陈月 4 ;

作者机构： 1.淮海工学院海洋学院

2.河北职业技术师范学院

3.中国农业科学院植物保护研究所

4.淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点建设实验室

关键词： 辣椒疫霉菌;快速检测;实时荧光定量PCR

期刊名称： 作物杂志

ISSN： 1001-7283

年卷期： 2012 年 05 期

页码： 30-35

收录情况： 北大核心

摘要： 为建立快速准确的检测土壤中辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)的实时荧光定量体系的方法,根据辣椒疫霉菌保守的ITS序列设计的特异性荧光实时定量PCR的引物,通过对保守序列构建克隆文库,筛选阳性克隆子,制备用于实时荧光定量体系的标准品,从而构建优良的标准曲线。利用构建的标准曲线和优化的实时荧光定量体系对人工接种含梯度浓度的辣椒疫霉菌的土壤样品进行实时荧光定量PCR检测。辣椒疫霉菌荧光实时定量PCR检测体系的标准曲线的相关系数为R2=0.980,斜率为-3.295,扩增效率为101.1%,线性方程为Y=-3.295X+44.484,标准品的检测下限为1.000×102拷贝,带菌土壤的检测下限为1.236×103拷贝,约为4.887pg基因组DNA。经过土壤样品试验,得出标准曲线相关系数为0.9845,表明所建立的辣椒疫霉菌实时荧光定量PCR检测方法合理有效。

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