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基于PMA-qPCR检测青枯菌5号生理小种活菌的方法

文献类型： 中文期刊

作者： 曹梦琪 1 ; 王旭东 2 ; 王俊 3 ; 盛晟 1 ; 吴福安 4 ;

作者机构： 1.江苏科技大学中国农业科学院蚕业研究所

2.江苏科技大学生物与化学工程学院中国农业科学院蚕业研究所

3.江苏科技大学生物与环境工程学院

4.中国农业科学院蚕业研究所

关键词： 桑树青枯病;青枯菌5号生理小种;叠氮溴化丙锭;荧光定量PCR;活细胞

期刊名称： 蚕业科学

ISSN： 0257-4799

年卷期： 2015 年 41 卷 06 期

页码： 1004-1010

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 青枯菌5号生理小种(Ralstonia solanacearum race 5)是引发桑青枯病的病原菌。为了改进常规PCR方法不能对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的不足,建立叠氮溴化丙锭(PMA)预处理结合荧光定量PCR(q PCR)检测青枯菌5号生理小种活菌的方法。该方法首先将待检测样品的病原菌细胞用质量浓度为15 ng/μL的PMA暗孵育10 min后,在卤钨灯下曝光5min,以消除死菌细胞DNA的PCR扩增信号。用PMA-q PCR方法对含青枯菌5号生理小种活菌和死菌的混合样本的检测结果表明,死菌的存在不会对活菌细胞DNA的扩增产生影响。建立的PMA-q PCR标准曲线显示,在菌液浓度为103~107CFU/m L的范围内,qPCR循环阈值(Ct)与菌液浓度的对数值之间呈良好的线性关系,线性方程为y=-3.477x+47.489,R~2=0.997。建立的PMA-q PCR方法能更为准确地检测复杂样本中的青枯菌5号生理小种活菌数量,有助于对桑树青枯病的早期诊断和及时制定病害防控措施。

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