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芽胞外壁基质组成蛋白的编码基因启动子PexsY指导的cry1Ac基因表达

文献类型： 中文期刊

作者： 王冠男 1 ; 张喆 2 ; 曲宁 1 ; 彭琦 2 ; 张杰 2 ; 高继国 1 ; 宋福平 2 ;

作者机构： 1.东北农业大学生命科学学院

2.中国农业科学院植物保护研究所

关键词： 苏云金芽胞杆菌;PexsY启动子;Cry1Ac蛋白

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2014 年 54 卷 10 期

页码： 1138-1145

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】利用非cry基因启动子PexsY(芽胞外壁基质组成蛋白编码基因启动子)表达Cry1Ac晶体蛋白,发现可用于cry基因表达的新元件,为高效工程菌的构建奠定基础。【方法】采用启动子融合lacZ技术,通过β-半乳糖苷酶活性分析了PexsY启动子和截短的PexsY启动子的转录活性;利用该启动子在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD73菌株中表达了cry1Ac基因,通过透射电子显微镜观察晶体形态;蛋白定量、SDS-PAGE比较蛋白产量;生物活性测定进行功能验证。【结果】PexsY启动子在芽胞晚期转录活性很高,透射电镜观察到利用该启动子表达的cry1Ac基因形成了菱形晶体,SDS-PAGE分析可以检测到133kDa的Cry1Ac蛋白,且与cry3A启动子指导表达的蛋白产量相近,少于cry8E启动子指导表达的蛋白产量;生物活性测定表明PexsY指导表达Cry1Ac蛋白对玉米螟(Ostrinia furnacalis)具有杀虫活性。【结论】在Bt无晶体突变体中,非cry基因启动子PexsY可以正常表达133kDa的Cry1Ac蛋白,并形成晶体,具有在芽胞形成晚期表达cry基因的能力,该类启动子将在Bt工程菌构建中发挥重要作用。

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