文献类型： 中文期刊

作者： 陈达年 ¹ ; 马旭升 ² ; 代军飞 ² ; 汪洋 ² ; 李茜 ² ; 白衡 ¹ ; 毛甜甜 ¹ ; 刘永生 ³ ; 丁龙 ⁴ ; 陈昊翰 ⁴ ; 陈思言 ⁴ ; 饶宇飞 ⁴ ; 贾宁 ¹ ; 张杰 ² ; 郑海学 ² ; 刘湘涛 ² ;

作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室

3.河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室

4.深圳真瑞生物科技有限公司

关键词： ASFV;MGF360-13L;炎性因子;生长曲线测定

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 4419-4428

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在初步探究非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）多基因家族MGF360-13L基因的功能。使用生物信息学软件对MGF360-13L基因进行分析；构建真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L并转染至293T细胞进行表达；利用同源重组方法构建基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,以相同的感染复数（MOI=0.01）在猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中感染基因缺失毒株和亲本毒株（ASFV CN/GS/2018）后，利用红细胞吸附试验（HAD）计算病毒滴度并绘制体外生长曲线；以MOI=1将ASFV-ΔMGF360-13L和ASFV CN/GS/2018分别感染猪骨髓巨噬细胞（BMDM）,利用qPCR和ELISA测定细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果表明，MGF360-13L基因在ASFV基因Ⅱ型中相对保守，编码蛋白属于非分泌型、无跨膜区、亲水性好；构建的真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L被293T细胞表达；成功获得MGF360-13L单基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,与ASFV CN/GS/2018相比，其体外复制没有显著性差异；在ASFV-ΔMGF360-13L感染BMDM后，IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子在转录和分泌水平都显著高于ASFV CN/GS/2018。本研究成功制备了ASFV的MGF360-13L基因缺失毒株，并证实了MGF360-13L基因作为ASFV复制非必需基因具有抑制炎性因子表达的功能，这为进一步注释ASFV MGF360-13L基因功能提供了线索。