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伯氏疏螺旋体TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法的建立及对新疆地区蜱的检测

文献类型： 中文期刊

作者： 王娅 1 ; 叶锋 2 ; 刘丽娅 2 ; 谢彩云 2 ; 谷文喜 2 ; 钟旗 2 ; 易新萍 2 ; 古丽扎提?塔力甫汗 2 ; 马晓菁 2 ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院

2.新疆维吾尔自治区畜牧科学院兽医研究所

关键词： 伯氏疏螺旋体;TaqMan-MGB探针;荧光定量PCR;蜱;检测;新疆

期刊名称： 中国动物检疫

ISSN： 1005-944X

年卷期： 2019 年 36 卷 011 期

页码： 89-94,99

摘要： 为建立一种TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR方法,来快速、特异地检测伯氏疏螺旋体,根据GenBank发表的伯氏疏螺旋体16SrRNA序列,应用分子生物学软件进行比对,选取保守序列设计特异性引物及TaqMan-MGB探针,并优化荧光定量PCR反应体系及条件,分别对大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体进行扩增;构建伯氏疏螺旋体标准株16SrRNA基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行real-time PCR扩增,测定该方法的敏感性.结果可见:仅伯氏疏螺旋体出现阳性扩增,而大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体扩增均为阴性;该方法对阳性质粒的检测限约为100 copies/μL.应用该方法对新疆地区的100份蜱DNA样本进行检测,发现7份为伯氏疏螺旋体阳性.结果表明,本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有较高的特异性及良好的敏感性,为今后伯氏疏螺旋体的快速诊断及流行病学调查提供了技术支撑.

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