文献类型： 中文期刊
作者： 刘辉 1 ; 米荣升 1 ; 贾海燕 1 ; 王旭 1 ; 黄燕 1 ; 张烨华 1 ; 张晓丽 1 ; 杨衡 1 ; 韩先干 1 ; 陈兆国 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所 农业农村部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室(上海)农业农村部动物寄生虫学重点实验室
关键词： 刚地弓形虫;表面抗原糖蛋白相关序列;原核表达;定位
期刊名称： 中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2020 年 28 卷 004 期
页码： 17-23
摘要： 为表达弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(surface antigen glycoprotein 1-related sequences,SRS47D)并确定其在弓形虫中的定位,本研究将SRS47D基因序列插入原核表达载体pColdⅠ,构建原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性;利用His柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔,制备抗血清,通过间接ELISA检测血清效价;利用免疫荧光法检测蛋白在弓形虫速殖子中的定位.结果显示:成功构建了原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,表达产物约为55 kDa;重组蛋白能与感染弓形虫的小鼠血清发生特异性反应,免疫兔血清效价达到1:51200;免疫荧光检测结果显示,SRS47D蛋白分布在弓形虫速殖子表面,尤其前部和后部表膜.上述结果为进一步深入研究弓形虫SRS47D的特性和功能奠定了基础.
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