文献类型： 中文期刊

作者： 周红 ¹ ; 康权 ² ; 谢圣男 ³ ; 陈洁 ³ ; 石雨鹭 ³ ; 罗庆 ³ ;

作者机构： 1.重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室

2.重庆医科大学附属儿童医院普通外科创伤外科

3.重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所

关键词： 3-磷酸甘油酸脱氢酶;能量代谢;骨肉瘤;成骨分化;实时定量聚合酶链反应;人

期刊名称： 解剖学报

ISSN： 0529-1356

年卷期： 2022 年 004 期

页码： 488-497

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 探讨敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶（PHGDH）靶向能量代谢对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响。方法 Real-time PCR及Western blotting检测PHGDH在成骨细胞hFOB1.19和不同恶性程度骨肉瘤细胞TE85、MG63、143B中的表达。采用脂质体转染法将短发夹RNA（shRNA）-PHGDH重组质粒转染至143B细胞中，Real-time PCR和Western blotting检测PHGDH的表达变化；结晶紫染色法、细胞计数法、CCK-8实验检测细胞增殖；划痕实验检测细胞平行迁移能力，Transwell实验检测细胞垂直迁移及侵袭能力；Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法检测细胞凋亡；碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S染色检测成骨分化作用，Western blotting检测成骨分化指标Runt相关转录因子2（Runx2）、骨钙素（OC）的表达情况；Real-time PCR检测能量代谢相关基因葡萄糖转运蛋白1(（GLUT1）、6-磷酸果糖激酶1（PFK1）、M2型丙酮酸激酶（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）的表达，乳酸检测试剂盒测定乳酸分泌量，三磷酸腺苷（ATP）检测试剂盒检测ATP产生量。结果 PHGDH在143B细胞中的表达明显高于在hFOB1.19、MG63和TE85细胞中（P<0.01）;转染shRNA-PHGDH重组质粒使143B细胞中的PHGDH表达量降低（P<0.01）、增殖能力降低（P<0.01）、细胞迁移及侵袭能力减低（P<0.01）、凋亡率增高（P<0.01）、ALP染色阳性率增加（P<0.01）、茜素红染色阳性率增加（P<0.05）、Runx2（P<0.05）和OC的表达增高（P<0.01）、能量代谢相关基因（GLUT1、PFK1、PKM2、LDHA）的表达下调（P<0.01）、乳酸减少（P<0.01）、ATP增多（P<0.05）。结论 敲低PHGDH可通过能量代谢抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡，并促进其成骨分化。