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利用酵母随机展示技术对猪肺炎支原体P97上B细胞表位的筛选和鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 刘璐 1 ; 郭杰 1 ; 朱可蒙 1 ; 王宁 1 ; 辛九庆 1 ; 刘玉芬 1 ; 刘恒贵 1 ;

作者机构： 1.哈尔滨师范大学生命科学与技术学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体团队

关键词： 猪肺炎支原体;P97黏附蛋白;酵母展示文库;B细胞表位

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2018 年 07 期

页码： 1492-1499

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库,并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位。设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因,通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG,用DNaseⅠ将p97突变基因随机消化成长度100~250bp的片段,回收产物经3′端加A处理后与用XcmⅠ酶切的酵母表达载体pCT-XcmⅠ连接,将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库。利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆,并进一步鉴定其最小抗原表位。结果:1)克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×106克隆,所有插入的片段随机分布,覆盖了全长的p97突变基因,文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆;2)随后对文库进行流式细胞分选,经鉴定选出184号一个抗原多肽。从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D(DEKTSSQKDPSTLRA)多肽为一个B细胞表位,该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应。P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定,184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位,本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义。

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