文献类型： 中文期刊

作者： 李文 ¹ ; 韩玉萍 ¹ ; 赵向远 ¹ ; 范冰峰 ¹ ; 李晓霞 ¹ ; 刁云飞 ¹ ; 杨镒峰 ¹ ; 许保增 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学重点实验室

关键词： 水貂;腺病毒转染;成纤维细胞;细胞培养

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2020 年 01 期

页码： 37-43

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在探究利用携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体转染入水貂耳缘成纤维细胞的可行性及感染效率。首先利用组织贴壁法分离培养水貂原代耳缘成纤维细胞并进行传代,然后包装病毒Ad-EGFP并使用TCID_(50)法进行滴度检测,设置两组不同浓度梯度的病毒液感染水貂耳缘成纤维细胞,感染复数(MOI)值分别为0/100/300/500/700/900和0/10/30/50/70/90,通过在显微镜下观察阳性细胞占总细胞数的比值估计转染效率(%)。结果表明,组织贴壁法培养水貂耳皮肤组织11 d可长满原代细胞,传代细胞在3～4 d融合度可达80%左右,包装Ad-EGFP病毒滴度为1.99×10~(11) PFU/mL,用其感染水貂成纤维细胞最佳MOI值为30,瞬时转染效率可达90%以上。综上,利用腺病毒载体转染水貂成纤维细胞具有可行性,是一种高效的转染方式,为后续水貂基因组编辑前期验证试验奠定基础。