文献类型： 中文期刊
作者： 顾丽姣 1 ; 魏恒玲 2 ; 喻树迅 2 ;
作者机构： 1.中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室
2.中国农业科学院棉花研究所
关键词： 棉花;GhWRKY91基因;SDS-PAGE;原核表达;表达分析
期刊名称： 安徽农业大学学报
ISSN： 1672-352X
年卷期： 2021 年 006 期
页码： 878-882
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了筛选出高表达棉花GhWRKY91可溶性蛋白的原核表达载体。以中棉所10号叶片的cDNA为模板PCR扩增GhWRKY91基因,扩增产物分别构建到4个不同的原核表达载体pET-22b（+）、pET-32a（+）、pMAL-c5x和pGEX-4T-1。将重组载体pET-22b（+）-GhWRKY91、 pET-32a（+）-GhWRKY91、 pMAL-c5x-GhWRKY91和pGEX-4T-1-GhWRKY91转化到大肠杆菌菌株BL21（DE3）或Arctic-ExpressTM（DE3）RP中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析不同原核表达载体的蛋白表达情况。结果显示,pET-22b（+）-GhWRKY91和pET-32a（+）-GhWRKY91在BL21（DE3）中以及pMAL-c5x-GhWRKY91在Arctic-ExpressTM（DE3）RP中均未见明显蛋白表达,而pGEX-4T-1-GhWRKY91在Arctic-ExpressTM（DE3）RP中表达的蛋白基本存在于上清中,可获得可溶性蛋白。因此,将GhWRKY91基因构建到pGEX-4T-1原核表达载体上可成功获得可溶性蛋白。
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