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鞘磷脂对小鼠肌卫星细胞C2C12成肌分化的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 侯乃鹏 1 ; 王煜 1 ; 陶聪 1 ; 王彦芳 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 鞘磷脂;C2C12细胞;成肌分化

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2021 年 011 期

页码： 4074-4083

收录情况： 北大核心

摘要： 研究通过检测鞘磷脂对小鼠肌卫星细胞C2C12成肌分化的影响,旨在为阐明鞘磷脂对解偶联蛋白1（UCP1）基因敲入猪骨骼肌生长的影响提供理论依据。用ELISA法检测野生型猪和UCP1敲入猪背部肌肉及血清中总鞘磷脂含量;利用CCK8法检测不同浓度（0、5、20、50和100μg/mL）鞘磷脂对C2C12细胞增殖和毒性的影响,并通过形态学观察和分化前后细胞成肌分化标记基因生肌因子5（Myf5）、生肌决定因子（MyoD）、肌细胞生成素（Myogenin）、生肌调节因子4（MRF4）的表达检测,建立C2C12成肌分化体系;在成肌分化培养基中添加上述不同浓度的鞘磷脂,诱导分化6 d后,通过形态学和Myogenin免疫荧光染色观察肌管的形成及成肌分化标记基因的mRNA表达水平检测,确定鞘磷脂的最佳添加浓度。用筛选出的最佳鞘磷脂添加浓度诱导细胞成肌分化,在2、4和6 d收集细胞,利用实时荧光定量PCR检测周期蛋白相关基因CyclinD1、CyclinE、CDK2和CDK4的表达水平,CCK8法检测诱导2 d细胞的活力。结果发现,与野生型猪相比,UCP1-KI猪背部肌肉组织中总鞘磷脂含量显著增加（P<0.05）;血清鞘磷脂含量差异不显著（P>0.05）;不同浓度鞘磷脂对未分化C2C12细胞的增殖无显著影响（P>0.05）;成肌分化6 d后,C2C12细胞形成明显的肌管,成肌分化标记基因Myf5、MyoD、Myogenin、MRF4的mRNA和蛋白水平均极显著上调（P<0.01）;与未添加鞘磷脂的对照组相比,20μg/mL鞘磷脂组有更多肌管形成,Myogenin阳性信号和肌管融合指数均显著增加（P<0.05）,Myogenin、MRF4基因的表达量显著提高（P<0.05）。利用20μg/mL鞘磷脂诱导细胞分化,在分化2 d时,处理组CyclinE、CDK4基因表达量显著高于对照组（P<0.05）,细胞活力也显著高于对照组（P<0.05）;分化6 d后,处理组CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4基因表达量均显著低于对照组（P<0.05）。本研究结果表明,20μg/mL鞘磷脂能够提高小鼠肌卫星细胞C2C12分化早期细胞活力和成肌分化效率,可为研究鞘磷脂对骨骼肌生长的影响提供一定的参考。

  • 相关文献

[1]成肌细胞成脂过程中PPARγ、C/EBPα和Myogenin基因启动子的甲基化变化. 姜美华,巨婷婷,刘洋,许玲,孙文娟,赵泮峰,尹靖东. 2013

[2]miR-143在肌细胞中的表达及其影响. 王辰,张晶,谢炳坤,周荣,李奎,唐中林. 2014

[3]Mstn基因敲除小鼠肌肉和C2C12细胞的转录特征分析. 景新阳,莫家远,王楠,刘永刚,牟玉莲,林鑫,黄雷,朱振东,李奎. 2024

[4]多浪绵羊骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及成肌诱导分化. 赵谦,张萍,李向臣,关伟军,浦亚斌,赵倩君,马月辉. 2016

[5]山羊胎儿肌肉干细胞的分离培养与成肌诱导分化. 睢梦华,郑琪,吴昊,丁建平,刘勇,李文雍,储明星,张子军,凌英会. 2018

[6]MiR-192在绵羊骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化中的功能研究. 赵谦. 2016

[7]长链非编码RNA-MEG3对小鼠肌肉发育调控机制的研究. 王辰. 2014

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