文献类型： 中文期刊
作者： 陈宇 1 ; 米荣升 1 ; 龚海燕 1 ; 程龙 1 ; 王旭 1 ; 韩先干 1 ; 黄燕 1 ; 陈兆国 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室农业农村部动物寄生虫学重点实验室
关键词： 微小隐孢子虫;cpeld基因;CpCML基因;原核表达;真核表达
期刊名称： 动物医学进展
ISSN： 1007-5038
年卷期： 2021 年 005 期
页码： 50-57
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了实现微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）E2F样结构域包含转录因子编码基因cpeld的原核和真核表达,设计2对特异性引物,以C.parvum卵囊cDNA为模板,PCR扩增得到cpeld基因,将其分别插入pET32a和p3XFLAG-CMV14载体。同时设计引物,扩增微小隐孢子虫类钙调蛋白（C.parvumcalmoduin-like proteins）的编码基因CpCML,插入pcmv-HA载体。将鉴定正确的重组质粒分别转入BL21（DE3）和293T细胞进行表达,Western blot观察重组蛋白的反应原性。结果显示,成功构建了重组原核表达质粒pET32a-cpeld和真核表达质粒p3XFLAG-CMV14-cpeld以及pcmv-HA-CML;SDS-PAGE显示,重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达出了分子质量约为55 ku的重组蛋白;Western blot分析显示,原核表达的重组蛋白能与鼠抗His单克隆抗体,真核表达重组CpELD和CpCML蛋白能分别与抗FLAG和HA单克隆抗体反应。结果表明,成功实现了cpeld基因的原核和真核表达以及CpCML基因的真核表达,表达产物具有良好的反应原性,为后续开展隐孢子虫CpELD和CpCML的功能和作用机制研究、新型的防控技术研发奠定了基础。
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