文献类型： 中文期刊

作者： 刘雨欣 ¹ ; 陈思 ¹ ; 高阳 ¹ ; 顾德媛 ¹ ; 彭海涛 ¹ ; 张东 ¹ ; 张如 ¹ ; 许会会 ¹ ; 刘亚乔 ² ; 杨艳玲 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院特产研究所

2.中华人民共和国大窑湾海关

关键词： 布鲁菌;外膜囊泡;蛋白质组学;免疫原性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 007 期

页码： 3378-3389

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在提取羊布鲁菌生物3型外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)并分析其蛋白组成成分,制备OMVs亚单位疫苗,评价OMVs疫苗的免疫原性.本研究利用差速离心法提取了 OMVs,通过SDS-PAGE、透射电镜和ZeTA纳米粒径对OMVs进行鉴定;利用Label free液相质谱技术鉴定OMVs蛋白质组成成分,并进行GO聚类分析和KEGG富集分析;OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后,对小鼠脾脏进行病理检测和T细胞亚群分类检测;对小鼠血清进行IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A炎性细胞因子水平检测和IgG 1、IgG 2a和IgG 2b免疫球蛋白含量检测,评价OMVs免疫后小鼠的病理变化和细胞免疫水平.结果显示:成功提取了 OMVs,其粒径大小为20~200 nm,相对分子质量在10~130 ku之间.蛋白质组学鉴定结果显示,OMVs中含有1 612种蛋白质,其中包括Omp2b、Omp25、Omp31、Omp19和Bp26等多种外膜蛋白,以及脂蛋白和ABC转运体相关蛋白质.OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后,小鼠脾脏未见明显的淋巴细胞排列疏松及坏死;诱导小鼠产生高水平IgG免疫球蛋白含量;同时诱导小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-17A和TNF-α炎性细胞因子表达量上升,IL-10和IL-4炎性细胞因子表达量下降;CD4+/CD8+T细胞比值增加.本研究证明OMVs中含有多个有效的免疫原性抗原,能诱导小鼠产生较好的细胞免疫水平,为明确布鲁菌OMVs蛋白成分和布鲁菌亚单位疫苗研发奠定了理论基础.