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小桐子SSR-PCR反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 王乐乐 1 ; 李明芳 2 ; 刘兴地 3 ; 郑学勤 4 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

3.海南省热带生物质能源工程技术研究中心

4.农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室

关键词： 小桐子;DNA提取;SSR-PCR反应;体系优化

期刊名称： 热带生物学报

ISSN： 1674-7054

年卷期： 2015 年 6 卷 04 期

页码： 478-484

摘要： 采用改良的CTAB法从小桐子嫩叶中提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳和SSR-PCR扩增检测,结果表明,改良CTAB法提取的小桐子基因组DNA完整性好,纯度较高,可作为SSR分子标记的模板。同时,对影响小桐子SSR-PCR扩增的d NTPs、Taq DNA聚合酶、引物及Mg2+浓度等4个因素进行了优化,优化后的小桐子SSR-PCR扩增的最佳反应体系为:在20μL的反应体系中含有模板DNA 100 ng,d NTPs 0.2 mmol·L~(-1),Taq DNA聚合酶100 U·m L~(-1),引物0.6μmol·L~(-1),Mg~(2+)1.5 mmol·L~(-1)。适宜的扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性1 min,51~53℃(退火温度随引物不同而改变)退火1 min,72℃延伸2 min,35个循环;72℃延伸10 min。

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