文献类型： 中文期刊

作者： 杨晓媛 ¹ ; 薛雨佳 ² ; 杜文乐 ² ; 崔赛赛 ² ; 刘家森 ² ; 康洪涛 ² ; 姜骞 ² ; 曲连东 ¹ ;

作者机构： 1.东北农业大学动物医学学院

2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 少突胶质前体细胞(OPC);原代细胞培养;犬;嗜神经病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 004 期

页码： 327-332

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立研究嗜神经病毒致病机制的可靠细胞模型，本实验将健康幼犬剖杀无菌去除其脑膜、脑干及血管等结构，收集并处理大脑皮质后，利用神经组织解离试剂盒及配套设备对大脑组织解离，采用3次差速贴壁法从犬大脑皮质中纯化细胞。3次贴壁后观察可见，贴壁细胞体积较大，突起数量增加，突起变长有分支，分支呈交叉状态。进一步采用间接免疫荧光试验（IFA）和RT-PCR鉴定纯化后的细胞，结果显示，纯化的细胞中少突胶质前体细胞标记物CSPG4抗体和基因检测均为阳性，而其他细胞标记物的抗体和基因检测均为阴性，表明获得了纯化的犬少突胶质前体细胞（OPC），纯度约97%。对分离纯化后的OPC采用PCR/RT-PCR检测常见犬外源病毒，结果显示，犬瘟热病毒（CDV）、犬副流感病毒5型（CPIV5）、犬细小病毒（CPV）均为阴性结果，表明获得的OPC无常见犬外源病毒感染。将犬源嗜神经病毒CDV和CPIV5分别感染OPC，感染后24 h和48 h观察细胞形态，并采用IFA鉴定两种病毒的感染状况。细胞形态观察可见，接种CDV 24 h出现细胞病变，48 h后的细胞病变更为明显，大部分细胞圆缩、聚堆、甚至脱落；接种CPIV5 24 h的细胞无明显病变，48 h出现圆缩、聚堆，但无明显脱落，与自然感染的细胞形态一致。IFA结果显示，CDV和CPIV5感染的细胞均出现绿色荧光，但CDV感染细胞出现的绿色荧光多于CPIV5感染的细胞。上述结果表明犬源OPC可作为CDV、CPIV5等嗜神经病毒感染的细胞模型。本研究获得了犬大脑皮质OPC的体外分离、纯化及培养方法，建立了嗜神经病毒感染的细胞模型，为该类病毒致病机制的研究奠定了实验基础。