文献类型： 中文期刊

作者： 叶方钰 ¹ ; 刘爽 ¹ ; 王权 ¹ ; 戚雪芹 ¹ ; 张传印 ¹ ; 谢雨芮 ¹ ; 潘翠玲 ² ; 蒋蔚 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所

2.南京农业大学动物医学院

关键词： 奶牛乳房炎;无乳链球菌;停乳链球菌;乳房链球菌;多重PCR

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年 002 期

页码： 182-188

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 链球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌，其中无乳链球菌（S.agalactiae）、停乳链球菌（S.dysgalactiae）和乳房链球菌（S.uberis）是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌。为同时、快速地检测牛奶样品中这3种重要链球菌，本研究根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌Mig基因及乳房链球菌pauA基因设计特异性引物，同时以细菌16S rRNA基因为内参，建立了多重PCR检测方法，并进行条件优化。结果显示，该方法最佳退火温度为58℃，最佳扩增循环数为25个循环，本方法同时检测无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌时，检测限分别为1×10~3CFU/m L、1×10~3CFU/m L及1×10⁴ CFU/m L，灵敏性高。该方法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、单核细胞增生李斯特菌等10种菌均无交叉反应，特异性好。模拟样品结果显示，当奶样中3种菌的初始浓度均为1 CFU/m L时，37℃增菌6 h即可检出乳房链球菌，增菌8 h以上3种菌可全部检出。结果表明，该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性，对同时快速检测牛奶中无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌具有重要意义，也为奶牛乳房炎的监管、诊治提供了技术支持。