文献类型： 中文期刊

作者： 葛家振 ¹ ; 高鹏程 ¹ ; 田彤彤 ¹ ; 吴晓妮 ¹ ; 李倩倩 ¹ ; 田可昕 ¹ ; 宋国栋 ¹ ; 郑福英 ¹ ; 储岳峰 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 山羊支原体山羊肺炎亚种;改良培养基;荚膜多糖;紫外图谱;CTAB沉淀法

期刊名称： 生物工程学报

ISSN：

年卷期： 2023 年 012 期

页码： 4874-4886

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp）是山羊传染性胸膜肺炎（contagious caprine pleuropneumonia,CCPP）的病原，可用灭活疫苗和荚膜多糖（capsular polysaccharide,CPS）间接血凝试剂进行预防和血清学检测，但高昂的培养成本和复杂的抗原定量一直困扰着生产人员。为解决生产实际中出现的这些问题，本研究基于Mccp代谢组学的前期理论基础，通过改变初始p H值的方法，初步筛选出初始p H值为7.8的可以同时提高2种抗原产量的糖发酵培养基。利用紫外可吸收光谱可识别酚红，以及十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide,CTAB）可与阴离子荚膜多糖结合的理论依据，建立了利用紫外光谱分析Mccp达到的培养阶段，以及利用CTAB沉淀法相对定量发酵液荚膜多糖抗原产量的方法。通过紫外图谱观察的方法可对应Mccp生长曲线进行指导生产，大大节省传统颜色变化单位（color change unit,CCU）法的监测时间，提高了原肉眼观察方法的精确度。建立的CTAB沉淀法可在5 h内完成对CPS含量的监测，与传统的差值法相比大大缩短了时间，并且其准确度得到苯酚-硫酸法的验证。本研究优化的一种培养基和建立的两种相关性比较方法，可有效降低Mccp生产成本，提高生产效率，这些方法已在本实验室的研究阶段得到应用，为进一步改进CCPP灭活疫苗和荚膜多糖的生产工艺以及快速定量提供了实验数据。