文献类型： 中文期刊
作者： 张康 1 ; 张璇 2 ; 闫遵祥 1 ; 王磊 1 ; 张凯 1 ; 张景艳 1 ; 罗永江 1 ; 仇正英 1 ; 薛欢 3 ; 李建喜 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院 兰州畜牧与兽药研究所/ 农业农村部兽用药物创新重点实验室/ 甘肃省新兽药工程重点实验室
2.兰州理工大学生命科学与工程学院
3.西安交通大学 基础医学院
关键词： 牛病毒性腹泻病毒;Core蛋白;表达;多克隆抗体
期刊名称： 浙江农业学报
ISSN： 1004-1524
年卷期： 2019 年 31 卷 011 期
页码： 1819-1824
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白.将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1:512000.蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性.本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础.
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