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猪免疫球蛋白J链表达及抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 颜露玲 1 ; 付钰广 2 ; 唐雨童 2 ; 李文杰 2 ; 刘光亮 2 ; 王衡 1 ;

作者机构： 1.华南农业大学兽医学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 猪免疫球蛋白J链;原核表达;抗血清

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2025 年 57 卷 010 期

页码： 45-52

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清,为研究J链的免疫学功能提供材料.运用PCR扩增J链开放阅读框,并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证;将J链与弗氏完全佐剂混合后经背部皮下免疫新西兰大白兔制备抗血清;采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)对获得的抗血清进行功能验证.结果:猪免疫球蛋白J链在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经变性复性后通过NI-NTA亲和层析的方法纯化出纯净的目的蛋白;ELISA检测结果显示,四免后兔血清中抗体效价可达1∶6 400;Western blot结果显示,获得的抗血清能与原核表达的J链特异性结合;为进一步验证抗血清的反应性,构建了pcDNA3.1-J重组载体,将其转染293T细胞,IFA与Western blot检测结果显示,本研究制备的抗血清能与真核表达的猪免疫球蛋白J链特异性结合,通过ELISA和Western blot检测抗血清与猪乳中J链的反应性,结果显示能与猪乳中的J链反应.综上表明,本研究成功制备出猪免疫球蛋白J链抗血清.

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