文献类型： 中文期刊

作者： 丁小雨 ¹ ; 李振通 ² ; 段鹏飞 ² ; 邱弈树 ¹ ; 王心怡 ² ; 黎琳琳 ² ; 王林娜 ² ; 刘阳 ² ; 李文升 ³ ; 王清滨 ³ ; 赵侠 ³ ; 田永胜 ² ; 李胜忠 ¹ ;

作者机构： 1.新疆农业大学生命科学学院

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所

3.莱州明波水产有限公司

关键词： 鞍带石斑鱼;精子;超低温冷冻;超微结构;酶活性;计算机辅助精子分析系统

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2023 年 47 卷 007 期

页码： 48-64

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究长期超低温冷冻保存中鞍带石斑鱼精子质膜、活力、超微结构及酶活性的变化,阐明影响鞍带石斑鱼精子冷冻保存质量的相关机制.实验采集 2022 年鞍带石斑鱼鲜精及储存时间分别为 23、49 和 61 个月的冷冻保存精液,用伊红-苯胺黑染色方法检测精子质膜完整性;用计算机辅助精子分析仪(CASA)检测精子运动参数;测量精浆和精子中琥珀酸脱氢酶(SDH)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和肌酸激酶(CK)共 6 种酶活性的变化及三磷酸腺苷(ATP)浓度变化;用扫描电镜和透射电镜观察鲜精和冻精超微结构.结果显示,伊红-苯胺黑染色后,鲜精质膜完整性最高,为 83.43%±2.73%,经过超低温冷冻后,精子质膜完整性显著降低,且随着冷冻保存时间的延长而逐渐降低.CASA结果显示,鲜精活力最高,为 90.47%±3.34%,经过超低温冷冻后精子活力显著降低,但长期保存 23~61 个月的精子活力无显著差异,精子活力保持在(63.95%±3.66%)~(68.58%±2.73%),具有稳定的活力,且鲜精与冻精之间精子平均直线运动速度(VSL)、平均曲线运动速度(VCL)和平均路径速度(VAP)均没有显著差异.精子超微结构显示,鲜精形态结构正常、线粒体排列结构规则、形态大小正常.经过超低温冷冻保存后,精子形态结构损伤明显,表现为精子头部质膜破损、细胞质外漏、细胞核膜破损、尾部鞭毛断裂或脱落等.鞍带石斑鱼精浆和精子超低温冷冻前后 6 种酶活性的变化及ATP含量结果显示,经过超低温冷冻后,精子内SOD、GSH-Px和CAT及ATP含量均显著降低.精浆中酶活性升高,除GR和CAT外,其余酶活性均差异显著.研究表明,长期超低温冷冻对鞍带石斑鱼精浆和精子酶活性、精子活力及精子超微结构均具有较显著的影响.本研究结果为鱼类精子冷冻损伤机理研究积累了丰富的数据,为鱼类精子长期冷冻保存提供了技术参考和评价指标.