文献类型： 中文期刊

作者： 包艳芳 ¹ ; 蒋韬 ¹ ; 何莉 ¹ ; 吕律 ¹ ; 李涛善 ¹ ; 李昕 ¹ ; 孙燕燕 ¹ ; 杨光 ¹ ; 魏婷 ¹ ; 潘晓乐 ¹ ; 林密 ¹ ;

作者机构： 1.兰州兽研生物科技有限公司;中国农业科学院兰州兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室/国家口蹄疫参考实验室

关键词： 磁微粒化学发光免疫分析法;口蹄疫;磁微粒;全自动化

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2024 年 57 卷 004 期

页码： 810-819

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [背景]口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病,疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施.免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据,是免疫工作和疫情防控必不可少的关键环节,因此建立高效、快速、全自动的抗体检测方法具有重要意义.[目的]基于磁微粒(micromagnetic particles,MPs)化学发光免疫分析技术(CLIA),建立一种新型、全自动、可定量的口蹄疫病毒 O型抗体检测方法,为口蹄疫免疫监测和疫情防控提供技术支撑.[方法]使用纳米材料磁微粒为固相载体和分离载体包被捕获抗体,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记检测抗体,经过条件优化建立了一种新型磁微粒 CLIA 检测方法(magnetic particle chemiluminescence immunoassay,MP-CLIA).本方法首先加入磁微粒-兔抗偶联物(magnetic particle-polyclonal antibodies,MPs-pAbs)、待测样本、口蹄疫病毒 O 型抗原,37℃孵育;再加入适量酶标抗体(ALP-pAbs),37℃孵育;最后加入化学发光底物AMPPD,检测相对发光强度(relative light unit,RLU).研究通过检测标准品拟合标准曲线,并应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定检测方法的判定标准;利用质控样本进行方法学评价,同时检测田间样本,并和液相阻断 ELISA(LPB-ELISA)比对,验证临床检测效果.[结果]优化后最佳反应条件为磁微粒浓度 0.25 mg·mL-1、口蹄疫病毒 O 型抗原 1﹕1 000 稀释、酶标抗体 1﹕2 000稀释、加样量 20 μL.整个检测过程均在全自动化学发光免疫分析仪中完成,反应时间 20 min,在抗体含量 0-1 280 U(效价 0-1﹕2 048)范围内标准曲线R 2>0.99,可进行定量检测.该方法敏感性为 94.66%;特异性为 97.10%,检测口蹄疫A型、Asia I型血清型特异性为 97.14%,与塞内卡病毒(SVV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、牛流行热病毒(BEFV)、猪圆环病毒 2 型(PCV2)、羊痘病毒(QRFV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体阳性血清无交叉反应;重复检测变异系数 CV值<10%;田间样本检测结果与LPB-ELISA符合率为 94.69%,定量结果相关系数R 2 为 0.8473,P<0.0001,相关性显著.[结论]建立的 MP-CLIA 方法耗时短、操作简便,配套国产全自动化学发光仪,可进行全自动化检测,是一种新型、高效的口蹄疫病毒 O 型抗体定量检测方法,本方法对应的试剂盒已经完成中试生产和临床检测试验,在全国不同区域试用效果较好,具有较高的临床应用价值.