文献类型： 中文期刊

作者： 黄志成 ¹ ; 白宇彤 ¹ ; 陈胜利 ² ; 李章程 ² ; 兰仕梅 ² ; 李延召 ² ; 刘爽 ² ; 郝华芳 ² ; 刘冠慧 ¹ ; 储岳峰 ² ;

作者机构： 1.河北工程大学生命科学与食品工程学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院/家畜疫病病原生物学国家重点实验室

关键词： 牛支原体;脂蛋白;LppB;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN：

年卷期： 2023 年 006 期

页码： 108-113

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在克隆牛支原体脂蛋白LppB基因，并进行原核表达与纯化，制备其多克隆抗体，研究其对天然蛋白的识别能力。以牛支原体PG45、ZYJ5及GT01株基因组DNA作为模板，PCR扩增LppB基因，测序并比对分析；将合成的pET-30a-LppB质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，诱导表达产物用Ni-NTA纯化，Western blot方法验证纯化重组蛋白，测定其反应原性；将纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，并测定其ELISA效价，Western blot测定多克隆抗体对牛支原体LppB的识别。结果显示：PCR扩增的LppB基因全长约1 860 bp,与预期大小相符；LppB主要为可溶性表达，大小约为74 kDa,经Ni柱纯化后获得纯化蛋白，LppB蛋白具有良好的反应原性；制备出小鼠抗LppB多克隆抗体，ELISA效价为1∶25 600,能够识别天然LppB蛋白。本研究成功制备出牛支原体重组LppB蛋白及其多克隆抗体，为LppB功能研究奠定基础。