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茎尖法转基因棉花植株真实性鉴定方法探究

文献类型： 中文期刊

作者： 肖荣 1 ; 魏云晓 1 ; 王远 1 ; 孟志刚 1 ; 梁成真 1 ; 陈全家 1 ; 张锐 1 ;

作者机构： 1.新疆农业大学农学院棉花教育部工程研究中心农业生物技术重点实验室;中国农业科学院生物技术研究所

关键词： 棉花;茎尖转化;假阳性植株;鉴定方法

期刊名称： 生物技术进展

ISSN： 2095-2341

年卷期： 2022 年 01 期

页码： 83-89

摘要： 棉花茎尖转化法具备不受基因型限制、转化周期短的优点,是理想的棉花转化体系,但据报道其所获得的转基因植株普遍存在遗传不稳定、高代植株基因丢失的现象。以陆地棉TM-1品种为受体材料,利用茎尖转化法将DsRed2载体转入棉花,经卡那霉素筛选获得16株抗性植株,进一步PCR扩增靶基因,获得6株DsRed2基因片段PCR检测为阳性的植株,初步判断该6株为茎尖转化法获得的转基因植株,但经紫外照射,6个转基因植株均未检测到红色荧光。对其进行靶基因RT-PCR,发现DsRed2基因在6个转基因植株中仅有极低量的表达或无表达。进一步对DsRed2载体的非T-DNA片段,即载体骨架部分进行PCR以及植株内生菌培养检测,结果表明,6个转基因植株均含有完整的DsRed2载体,植株可培养出含有完整载体的内生菌,且内生菌经农杆菌16S核糖体RNA(16S rRNA)片段PCR检测结果为阳性,推测由于茎尖侵染形成农杆菌与植株共生关系,造成假阳性株的现象,进而导致高代转基因植株基因丢失、遗传不稳定的现象。旨在建立一套完整的茎尖法转基因棉花植株真实性的鉴定方法,为进一步深入研究提供参考依据。

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