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禽致病性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2 EivC点突变的构建及其ATPase活性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 许漩 1 ; 王少辉 2 ; 刘新 2 ; 王栋 2 ; 梁华 2 ; 黄彩兰 2 ; 吴晓君 2 ; 丁铲 2 ; 王桂军 2 ; 于圣青 3 ;

作者机构： 1.安徽农业大学动物科技学院;中国农业科学院上海兽医研究所

2.;安徽农业大学动物科技学院;中国农业科学院上海兽医研究所

3.;安徽农业大学动物科技学院;中国农业科学院上海兽医研究所;

关键词： 禽致病性大肠杆菌;Ⅲ型分泌系统2;eivC基因;ATPase

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2017 年 03 期

页码： 47-53

收录情况： 北大核心

摘要： 为了分析禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)Ⅲ型分泌系统2(E.coli TypeⅢsecretion system2,ETT2)Eiv C ATPase关键活性位点,本研究通过比对分析病原菌ATPase序列,筛选APEC ETT2 Eiv C的关键位点。然后设计点突变引物,通过PCR方法构建Eiv C点突变片段,构建Eiv C点突变重组表达质粒。经IPTG诱导表达后纯化相应蛋白,并检测其ATPase活性。结果显示,Eiv C蛋白包含F0F1 ATPase的保守序列,且具有ATPase活性。测序结果显示Eiv C第175、199、201、233位氨基酸突变成功,融合蛋白获得成功表达与纯化。然而,点突变与野生型Eiv C的ATPase活性差异不具有显著统计学意义。本研究结果表明第175、199、201、233位氨基酸不影响Eiv C的ATPase活性。

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