SARS-CoV-2重组痘苗病毒载体疫苗的构建、筛选、安全性和免疫原性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 毛泓月

作者： 毛泓月;李一权;丛佳南;杨霞;李玥;刘子睿;李善智;修志儒;李亚茹;李霄;尚超;朱羿龙;金宁一

作者机构：

关键词： SARS-CoV-2 RBDEPI;重组痘苗病毒;同源重组;免疫原性

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 271-275

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 利用穿梭质粒通过同源重组构建表达SARS-CoV-2 RBDEPI蛋白重组痘苗病毒，并对其进行筛选、鉴定和免疫原性检测。方法 参照SARS-CoV-2全基因组序列设计合成目的基因RBDEPI,通过PCR、测序、酶切连接将目的基因插入到痘苗病毒穿梭载体pSTKE中，构建pSTKE-RBDEP。将pSTKE-RBDEPI与天坛株痘苗病毒VTT共转染鼠肾细胞BHK-21中，通过同源重组，并以增强型绿色荧光蛋白EGFP为筛选标记，通过多次绿色荧光噬斑筛选获得重组病毒rVTT△TK-RBDEPI。利用RT-PCR和Western blot检测rVTT△TK-RBDEPI目的基因的转录和目的蛋白的表达情况；通过ELISA和ELISPOT检测rVTT△TK-RBDEPI免疫小鼠SARS-CoV-2与痘苗病毒载体特异性抗体水平和特异性淋巴细胞IL-4与IFN-γ的表达情况，确定rVTT△TK-RBDEPI的免疫原性。结果 经过10次绿色荧光噬斑筛选、RT-PCR与Western blot鉴定获得1株能够表达SARS-CoV-2 RBDEPI的重组痘苗病毒rVTT△TK-RBDEPI,且rVTT△TK-RBDEPI具备良好的免疫原性。结论 获得能够表达SARS-CoV-2 RBDEPI的重组痘苗病毒，该疫苗具有免疫原性，为以痘苗病毒为载体的SARS-CoV-2疫苗的进一步研究和临床治疗奠定了基础。

分类号： R392

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