剑麻均一化文库构建及PnRXLR5863靶蛋白筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨子平

作者： 杨子平;杨倩;汪询;柯智;鹿志伟;张燕梅;谌惠邦;周文钊

作者机构：

关键词： RXLR效应蛋白;剑麻;均一化文库;蛋白质相互作用;斑马纹病

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2023 年 002 期

页码： 246-253

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 剑麻是硬质纤维的主要来源，由烟草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的斑马纹病是剑麻生产的重要病害。RXLR效应蛋白是卵菌第一大类效应蛋白，能通过直接的蛋白质相互作用，靶向寄主防卫相关蛋白，干扰和抑制寄主防卫。利用转录组分析不同侵染阶段的烟草疫霉，发现PnRXLR5863表达量较高，并且其编码的蛋白含有信号肽、RXLR-EER和WY结构域，瞬时表达发现PnRXLR5863能引起烟草细胞死亡，推测PnRXLR5863在烟草疫霉侵染剑麻过程发挥重要作用，但是它作用于剑麻的靶蛋白和致病机制还未知。为了筛选PnRXLR5863的剑麻靶蛋白，应用Switching Mechanism at 5’end of RNA Transcript（SMART）和Duplex-Specific Nuclease（DSN）技术构建了剑麻均一化酵母cDNA表达文库，并筛选了与PnRXLR5863相互作用的蛋白。结果显示，构建的文库库容为5.32×10~7 CFU/mL，文库总克隆数为1.064×10~8 CFU，文库片段平均大小为1000 bp，重组率为100%；构建的pGBKT7-PnRXLR5863诱饵载体无自激活性；利用酵母双杂交系统，以pGBKT7-PnRXLR5863诱饵载体，从构建的文库中筛选获得23个与PnRXLR5863相互作用的蛋白。获得的候选靶蛋白主要参与分子功能和生物过程，涉及泛素化过程、蛋白合成、蛋白翻译和蛋白修饰等生理事件，暗示PnRXLR5863效应蛋白可能作用于剑麻的蛋白代谢。剑麻均一化酵母表达文库的构建和PnRXLR5863靶蛋白的筛选，为进一步深入研究PnRXLR5863的致病机理奠定基础。

分类号： S435.63

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