草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白的原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王杭军

作者： 王杭军;叶星;田园园;张莉莉;瞿兰;张蕊

作者机构：

关键词： 草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株;M5基因;免疫印迹;原核表达;纯化

期刊名称： 华中农业大学学报

ISSN： 1000-2421

年卷期： 2013 年 32 卷 02 期

页码： 103-108

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据草鱼呼肠孤病毒广东株GCRV-GD108编码VP5的M5基因的cDNA序列,分别设计合成带特定酶切位点的特异引物,进行PCR扩增;通过酶切与连接,构建2种重组表达载体pET30c-M5和pColdⅡ-M5,分别转化于大肠杆菌并进行诱导表达;对培养基、诱导时间、诱导剂浓度和温度等条件进行优化,确定最适表达体系。通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。结果显示,所构建的2种VP5蛋白原核表达载体,均在大肠杆菌中成功表达了分子质量大小(约80ku)与预期相符的重组蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。诱导表达后的菌体经离心、洗涤与超声破碎,离心收集包涵体。包涵体通过变性、透析与复性,获得纯化的重组蛋白,其中pET30c-M5/BL21(DE3)工程菌的目的蛋白占全菌蛋白的22.5%,纯化后获得了高纯度的重组蛋白(>95%)。比较2种表达载体的表达结果,pET30c-M5具有诱导表达耗时少、获得重组蛋白量大的优势,可为下一步的研究提供足量的蛋白。

分类号： S943

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