非洲猪瘟病毒一步法巢式锁核酸荧光定量PCR方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 施科达

作者： 施科达;徐民生;李艳;张昆丽;翟少伦;勾红潮;宋帅;杨冬霞;臧莹安;孙铭飞;李春玲

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;B646L（P72）蛋白基因;锁核酸修饰;一步法巢式荧光定量PCR

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2023 年 011 期

页码： 143-151

收录情况： CSCD

摘要： 试验基于非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）B646L（P72）蛋白基因序列，建立一种高灵敏度和高特异性的检测方法。采用Oligo 7软件设计一步法巢式锁核酸荧光定量PCR（One Step NestedLocked Nucleic Acid real-time PCR,LNA-OSN-PCR）的嵌套引物以及探针，并对外引物进行锁核酸修饰。建立并优化LNA-OSN-PCR反应体系和条件，确立LNA-OSN-PCR标准曲线，并检验LNA-OSN-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。采用LNA-OSN-PCR方法，对96份临床疑似患病样品进行检测，同时与普通荧光探针PCR方法进行比较。试验确立并优化了LNA-OSN-PCR的反应条件和体系，建立的LNA-OSN-PCR标准曲线，具有较好的线性（R~2=0.9945）。该方法的最低检测限为3×10-1copies/μL，变异系数小于3%，并且与其他病毒或细菌核酸无交叉反应。LNA-OSN-PCR方法与OIE推荐的荧光定量PCR方法比较，检测灵敏度提高10～100倍，在对96份临床疑似患病核酸样品进行检测中，检出55份阳性，41份阴性，比常规的荧光定量PCR具有更高的阳性检出率。并且能获得典型的扩增曲线。试验结合一步法巢式PCR和锁核酸修饰，建立了ASFV一步法巢式锁核酸荧光定量PCR，为检测ASFV提供一种高灵敏度和高特异性且经济实惠的检测方法。

分类号： S852.65

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