杧果脱镁叶绿素酶基因MiPPH的克隆及植物表达载体构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 俞凯莉

作者： 俞凯莉;赵志常;高爱平;罗睿雄;黄建峰;张梦云;李茂富

作者机构：

关键词： 杧果（Mangifera indica L.）;脱镁叶绿素酶（PPH）;基因克隆;植物表达载体

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2023 年 011 期

页码： 3628-3635

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 叶绿素降解是果实色泽形成过程中一个主要的影响因素。脱镁叶绿素酶（pheophytinase, PPH）是叶绿素降解代谢的关键酶。本研究提取杧果果皮总RNA，采用RACE方法,克隆得到一个脱镁叶绿素酶基因，并对其进行了初步的生物信息学分析。序列分析表明MiPPH基因cDNA序列全长1 267 bp，开放阅读框为1 113 bp，可编码370个氨基酸，分子量为41.73 kD，等电点为5.22。使用NCBI上的Conserved domains分析MiPPH蛋白结构域,结果显示MiPPH含有PLN02578、Abhydrolase＿1共2个结构域，其中PLN02578为保守域,其他物种PPH也都含有这个水解酶（Hydrolase）保守域，说明PPH蛋白有高度的保守性。通过BLAST上其他植物的氨基酸序列进行相似性比对，利用DNAMAN生成的系统进化树发现杧果MiPPH蛋白序列和与同为漆树科的开心果的PPH蛋白序列相似度较高，亲缘关系较近。利用定量PCR技术对不同品种中的MiPPH基因表达量进行分析，发现绿色‘桂七’品种表达量最高，而黄色‘金煌’品种表达量最低，黄色‘金煌’品种和红色‘贵妃’品种表达量相差不大。本试验成功构建pCAMBIA2300-GFP-MiPPH植物表达载体，通过农杆菌介导的烟草瞬时表达，亚细胞定位MiPPH主要定位于细胞核。本试验为后续进行PPH基因的功能验证提供试验基础。

分类号： S667.7

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