表达绿色荧光蛋白的重组鸡传染性支气管炎病毒的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周生

作者： 周生;唐梦君;戴亚斌;刘梅;赵宝华

作者机构：

关键词： 传染性支气管炎病毒;绿色荧光蛋白;重组病毒;病毒拯救

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2011 年 01 期

页码： 15-21

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探讨鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作为载体表达外源基因的可行性,本研究根据IBV H120疫苗株的全基因组序列设计引物,采用RT-PCR方法分10个片段对其基因组进行扩增,并克隆至pMD19-T载体中;同时构建IBV基因组5a基因编码区被增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因替换的重组质粒。采用体外拼接策略,将BsaI酶切处理的10个基因片段顺序连接,构建5a基因编码区被EGFP基因替换的基因组全长cDNA,其5'端具有完整的T7 RNA聚合酶启动子核心序列,3'端具有polyA尾巴结构。然后通过T7 RNA聚合酶体外转录系统合成病毒基因组RNA,脂质体转染BHK-21细胞进行病毒拯救。结果表明成功的从基因组全长cDNA拯救出重组病毒H120-5a/EGFP株,其在鸡胚中能有效的复制和传代,并表达绿色荧光蛋白;5a基因的缺失并不影响病毒对鸡胚的致病性。本研究为进一步开展IBV的分子致病机理、载体疫苗等研究奠定了基础。

分类号： S852.659.6

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