海藻酸裂解酶基因在毕赤酵母中的表达及重组酶性质的初步研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 岳明

作者： 岳明;丁宏标;乔宇

作者机构：

关键词： 海藻酸裂解酶;毕赤酵母;海藻寡糖;诱导表达

期刊名称： 海洋学报

ISSN： 0253-4193

年卷期： 2007 年 29 卷 5 期

页码： 154-160

收录情况： CSCD

摘要： 褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)是一种海藻酸降解菌.本实验采用PCR的方法,以褐球固氮菌基因组DNA为模板,克隆出约1.05 kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中,获得高效分泌表达海藻酸裂解酶的毕赤酵母工程菌株.用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到43 kDa的目的蛋白,酶活力可达1 400 U/cm~3左右.经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40 ℃,并且在20～55 ℃,pH2.0～11.0具有较好的稳定性.另外,10 mmol/cm~3的Cu~(2+),Fe~(2+),Co~(2+),Mn~(2+)和Ca~(2+)对酶有不同程度的抑制作用.

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