4种分子伴侣促进猫细小病毒样颗粒可溶性表达的研究

文献类型: 中文期刊

第一作者: 夏霖亚

作者: 夏霖亚;吴铭洁;王蕾;张宁;罗国良;吴丛梅;殷玉和

作者机构:

关键词: 猫细小病毒;病毒样颗粒;分子伴侣;VP2蛋白;原核表达;可溶性表达

期刊名称: 黑龙江畜牧兽医

ISSN:

年卷期: 2021 年 007 期

页码: 19-24,153

收录情况: 北大核心

摘要: 为了研究4种分子伴侣在E.coli表达系统中对猫细小病毒(feline Parvovirus, FPV)VP2蛋白表达及其组装的病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)活性的影响,试验构建重组质粒pET30a-VP2,将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣pKJE7、pKJE8、pGro7和pTf16转化至E.coli ER2566感受态细胞中进行共表达,运用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行检测,通过硫酸铵沉淀结合疏水层析柱对表达产物进行纯化,电镜观察VLPs的形态,并采用血凝试验检测其免疫活性。结果表明:重组质粒pET30a-VP2在E.coli表达系统中主要以包涵体形式表达蛋白。4种分子伴侣与重组质粒pET30a-VP2共表达,加入终浓度为2 mg/mL L-阿拉伯糖及0.1 mmol/L IPTG或5 ng/mL四环素的诱导剂,25℃诱导16 h,均能显著提高FPV VP2蛋白的可溶性表达,表达蛋白具有抗原特异性。纯化得到的FPV VP2蛋白在250 mmol/L NaCl(pH值为8.0)条件下可自组装形成均一、直径约为24 nm的VLPs。仅分子伴侣pTf16与重组质粒pET30a-VP2共表达获得的FPV VP2蛋白经透析形成的FPV VLPs正常,无碎片,其血凝效价为219。说明通过将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣在E.coli表达系统中共表达,4种分子伴侣均可促进FPV VP2蛋白的可溶性表达,成功纯化并获得FPV VLPs。

分类号: S852.65

  • 相关文献

[1]分子伴侣对A型FMDV结构蛋白VP1在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用. 崔颖磊,刘运超,冯华,刘畅,王彦伟,杨棋,王冬雨,张改平. 2018

[2]分子伴侣共表达对嗜热环糊精葡萄糖基转移酶异源可溶性表达的影响. 郭永华,陈济琛,贾宪波,林新坚. 2016

[3]芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核可溶性表达优化及包涵体复性研究. 李倩倩,李中媛,冯舵,黄火清,韩翠晓,杨培龙,姚斌,高伟. 2012

[4]PPV-VP2蛋白和PCV2-Cap蛋白二联亚单位疫苗的研究. 刘国阳,华涛,乔绪稳,唐波,常晨,侯继波,李锦春,张道华. 2018

[5]利用E.coli表达猪圆环病毒2型Cap蛋白生产病毒样颗粒疫苗. 赵晓云,乔绪稳,陈瑾,李鹏成,于晓明,朱国强,郑其升,侯继波. 2015

[6]猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的制备. 夏叶,郭佳宏,廖学文,李春华,易建中,凌红丽,蒋贻海,缪德年. 2017

[7]展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒构建及其免疫原性. 张雪花,郑其升,陈瑾,薛刚,侯红岩,侯继波. 2010

[8]鸡肺表面活性蛋白A的可溶性表达及活性检测. 黄琪,汪凯,潘玲,祁克宗,李泽君,陈鸿军,刘红梅. 2015

[9]伪狂犬病病毒gB抗原的可溶性原核表达及纯化条件的优化. 李娇阳,董虎,郭慧琛,孙世琪,张小丽. 2018

[10]马铃薯卷叶病毒CP基因水溶性原核表达的研究. 牛倩雅,辛佳,王晶珊,杨煜,李广存,郭宝太. 2015

[11]大菱鲆(Scophthalmus maximus)蛋白质二硫键异构酶SmPDIA3的表达分析和功能验证. 唐启政,孙志宾,王新安,马爱军,杨双双,黄智慧. 2019

[12]犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立. 易立,程世鹏,王建科,柴秀丽,罗彬,张海玲,吴威,闫喜军. 2010

[13]鸡传染性贫血病毒VP2基因的原核表达及兔抗血清的制备. 孙芬芬,高玉龙,潘伟,王笑梅. 2017

[14]传染性法氏囊病毒VP2蛋白的高效表达与免疫原性分析. 杨棋,魏蔷,刘运超,冯华,蒋大伟,陈玉梅,张改平. 2018

[15]水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价. 秦飞燕,孙杰,马凡舒,王洋,柏玲,张蕾,闫喜军. 2019

[16]猪细小病毒病毒样颗粒的体外组装. 宋品,孙世琪,董虎,滕志东,曹随忠,郭慧琛,余树民. 2017

[17]水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及病毒样颗粒制备. 吴铭洁,夏霖亚,王蕾,张宁,罗国良,殷玉和,吴丛梅. 2021

[18]同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR 方法的建立. 王翀,刘大飞,刘春国,柴洪亮,张洪英,程景,吕健,华育平,曲连东. 2014

[19]猫细小病毒NS部分基因的克隆及序列分析. 张洪英,刘立奎,姜建宏,崔尚金. 2004

[20]同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR方法的建立. 王翀,刘大飞,刘春国,柴洪亮,张洪英,程景,吕健,华育平,曲连东. 2014

作者其他论文 更多>>