东方百合高效转基因体系构建及EPSP基因的导入
文献类型: 中文期刊
第一作者: 张洁
作者: 张洁;郭文杰;蔡宣梅
作者机构:
关键词: 百合;EPSP基因;遗传转化;转基因
期刊名称: 北方园艺
ISSN: 1001-0009
年卷期: 2023 年 004 期
页码: 46-53
收录情况: 北大核心
摘要: 以东方百合‘西伯利亚’无菌鳞茎超薄切片(0.5~1.0 mm)为试材,通过PIC和2,4-D不同浓度筛选愈伤诱导培养条件,采用超薄鳞片直接分化及愈伤分化2种转化方式,测试对Cef、Kan及Hgy的耐受性,分析不同干燥预处理以及MES、AS对转化效果的影响,并通过EPSP基因的导入,验证基因转化阳性率及转化效果,以期优化百合遗传转化的技术参数,建立高效遗传转化体系并进行EPSP基因的导入。结果表明:PIC对百合愈伤诱导有良好效果,MS+1 mg·L-1 PIC+0.3 mg·L-1 NAA为最佳愈伤诱导培养基;抗生素敏感性测试发现,培养基添加75 mg·L-1 Kan或20 mg·L-1 Hyg结合250 mg·L-1 Cef适宜抗性筛选;超薄鳞片及愈伤在60 min和30 min的干燥预培养下,阳性率均显著提高;MS+10 mmol·L-1 MES+200μmol·L-1 AS为重悬液处理,超薄鳞片获得48.3%的高效转化率,优于愈伤转化;同时,将EPSP基因转化百合,分子检测表示已获得转基因阳性株。该研究建立以超薄鳞片和愈伤为受体的2套高效遗传转化体系,并成功导入EPSP基因,获得800 mg·L-1的草甘膦抗性,为转基因技术在后续的生产应用奠定技术基础。
分类号: S682.29
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